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浏览次数:171 分类:产品资料库 分类:新闻中心 分类:杂质对照品

药品标准是国家对药品质量规格及检验方法所作的技术规定,是药品必须达到的最基本的技术要求,属于强制性标准。质量标准研究也是工艺研究、工艺变更研究的基础和关键,质量标准就是核心竞争力。

新药申报时  药物质量标准中分析方法是必须方法验证的,药物生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法变更时,质量标准的分析方法都是需要验证的。

一、定义

方法确认是对非标准方法,实验室制定的方法,超出预定范围使用的标准方法或其它修改的标准方法确认能否合理,合法使用的过程。

方法验证是指在标准方法或者非标方法在引入实验室使用前,对实验室从人、机、料、法、环、测等方面评定其是否有能力在满足方法要求的情况下开展检测校准活动的过程。

二、区别

1、对象不同

方法确认的对象是:非标方法,包括部分非标准方法,实验室制定的方法,超出预定范围使用的标准方法,其它修改的标准方法。

方法验证的对象是:标准方法和经过确认的非标方法。

2、目的不同

方法确认的目的是:确认该非标准方法能否合理、合法使用。

方法验证的目的是:验证实验室是否有能力按方法要求开展检测/校准活动。

方法验证是针对标准方法进行的。“17025”中规定,在引入检测或校准之前,实验室应证实能够正确地运用这些标准方法。

标准方法是指由公认机构经过评价确认后向社会公开发布的技术规范文件。实验室在使用标准方法之前,应经过方法验证,或称之为方法证实,即实验室在使用标准方法进行检测前需要证实实验室使用标准方法的技术能力是否达到了标准的规定要求。

方法确认主要针对非标方法,其对象在“17025”标准中有所规定。从广义的理解来看,除了国际、区域、国家、行业、地方标准所规定方法以外的检测方法都属于非标准方法,除了第一类的方法属于标准方法,其他三类都属于非标准方法。

当实验室采用的检测方法为非标准方法时,就要对非标准方法进行确认,针对非标准方法的不同类型,进行区分来加以讨论。

三、方法验证总体原则

在化学分析实验室引入标准方法时,实验室应根据定量分析和定性分析所述,验证操作该方法是否满足标准的要求,即证实(注意讲的是证实)该方法能在该实验室现有的设施设备、人员、环境等条件下获得令人满意的结果,必要时可参加能力验证或进行实验室间比对。

如果只是对标准方法稍加修改(只要改了就要做),如使用不同制造商的同类设备或试剂等,必要时也应进行验证,以证明能够获得满意的结果,并将其修改内容制订成作业指导文件。

1、定量分析方法验证

方法验证过程中关键的参数应取决于方法的特性和可能测到的样品基质的检测范围,至少应测定正确度和精密度。对于痕量化学分析实验室,实验室还应确保获得适当的LOD和LOQ。通常情况下定量分析方法验证的参数选择可参考下表。

2、定性分析定性方法验证

分析的精密度通常表示为假阳性或假阴性率,其可以用不同的浓度水平来确定。实验室进行方法验证可分析一组阴性或阳性加强样品。如对每个不同的样品基质,两个重复样品在三个含量水平上加以分析。

建议的含量水平为空白(无分析物)、低浓度(接近方法的最低适用浓度)和高浓度(接近方法的最高适用浓度),可用标准加入法得到适当的浓度,即:按照同一个方法实施检测时,将测试样品分成两个或更多部分。一部分进行常规分析,其他部分在分析前加入已知量的标准分析物。

加入的标准分析物的量应是样品中分析物估计含量的2倍一5倍,也可以是按照方法定量限、容许限等推算的标准分析物的量。标准添加法可用于衡量方法回收率,其可能受测定样品中分析物的含量和基质等因素影响,也可用于评估在定量限、容许限等水平上的正确度。假阳性或假阴性率应与方法确认的数据相当,才能证明实验室有能力使用该方法。通常情况下定性分析方法验证的参数选择可参考上表。

四、实验室如何做方法验证?

1、实验室方法验证的一般要求:
1)、标准编制组应编制方法验证方案,根据影响方法的精密度和准确度的主要因素和数理统计学的要求,选择合适的实验室、样品类型、含量水平、分析人员、分析设备、分析时间等内容。
2)、标准编制组除可以使用有证标准物质/标准样品外,还应提供实际样品进行方法验证,实际样品应尽量覆盖方法标准的适用范围。
3)、在方法验证前,参加验证的操作人员应熟悉和掌握方法原理、操作步骤及流程,必要时应接受培训。
4)、方法验证过程中所用的试剂和材料、仪器和设备及分析步骤应符合方法相关要求。
5)、参加验证的操作人员及标准编制组应按照要求如实填写《方法验证报告》中的“原始测试数据表”,若有必要,应附上与该原始测试数据表内容相符的图谱或其他由仪器产生的记录打印条等。
6)、标准编制组根据方法验证数据及统计、分析、评估结果,最终形成《方法验证报告》。

2、方法确认的方法有6种:

1)使用参考标准或标准物质进行校准或评估偏倚和精密度。

2)对影响结果的因素进行系统性的评审。

3)通过改变控制参数检验方法的稳健性,如恒温箱温度,加样体积等。

4)与其它已确认的方法进行结果比对

5)实验室间比对

6)根据对方法原理的理解和抽样或检测方法的实践经验评定结果的测量结果不确定度。

3、方法验证的方法应包含以下几个方面:

1)对执行新方法所需的人力资源的评价,即检测/校准人员是否具备所需的技能及能力,必要时应进行人员培训,经考核后上岗。

2)对现有设备适用性的评价,是否要补充新的的标准器或标准物质。

3)对物品制备,包括前处理、存放等各环节是否满足新方法要求的评价。

4)对操作规范、不确定度,原始记录、报告格式及其内容是否适应新方法要求的评价。

5)对设施和环境条件的评价,必要时进行验证。

6)对新方法正确运用的评价,当有旧方法变更时,应对新旧方法进行比较,尤其是差异分析与比对的评价。

7)按新方法要求进行两次以上完整模拟检测/校准,出具两份完整结果报告。

注意:

1. 方法确认应有文件规定和相应记录,当修改已经确认过的方法时,应确定这些修改的影响,如果影响到原有的确认,应重新进行确认。

2.方法验证应有文件规定和相应记录,当方法变化后,应重新进行验证。

五、实验室方法验证的具体要求

1、检出限的验证
确定检出限,按方法操作步骤及流程进行分析操作,计算结果的平均值、标准偏差、相对标准偏差、检出限等各项参数。最终的方法检出限为各验证实验室所得数据的最高值。

2、精密度的验证
有证标准物质/标准样品的测定:采用高、中、低 3 种不同含量水平(应包括一个在测定下限附近的浓度或含量)的统一样品,每个样品平行测定 6 次以上,分别计算不同浓度或含量样品的平均值、标准偏差、相对标准偏差等各项参数。

实际样品的测定:各验证实验室应对 1 ~3 个含量水平的同类型样品进行分析测试,按每个样品平行测定 6 次以上,分别计算不同样品的平均值、标准偏差、相对标准偏差等各项参数。对各验证实验室的数据进行汇总统计分析,计算实验室间相对标准偏差、重复性限r和再现性限R。

3、准确度的验证
若各验证实验室使用有证标准物质/标准样品进行分析测定确定准确度,则需对 1 ~ 3个不同含量水平的有证标准物质/标准样品进行测定,按全程序每个有证标准物质/标准样品平行测定 6 次以上,分别计算不同浓度或含量水平有证标准物质/标准样品的平均值、标准偏差、相对误差等各项参数。

若实验室对实际样品进行加标分析测定确定准确度,则需对每个样品类型的1 ~ 3 个不同含量水平的统一样品中分别加入一定量的有证标准物质/标准样品进行测定,

每个加标样品平行测定 6 次以上,分别计算每个统一样品的加标回收率。对各验证实验室的数据进行汇总统计分析,计算其相对误差或加标回收率的均值及变动范围。

只有充分认识方法验证对质量标准方法的重要意义,建立科学合理的分析检测方法,对于保证临床用药安全起着重要作用。

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