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【收藏】如何提高色谱柱柱效?

浏览次数:87 分类:产品资料库 分类:新闻中心 分类:杂质对照品

色谱柱柱效是色谱柱对色谱中两种物质分离能力的大小。柱效越高,分离效果越好,峰形越好,反之则分离效果差,度峰形差,甚至不能完全分开两个物质。色谱柱的柱效和填料、柱问长、柱内径均有关系,一般来说,填料越细密、柱长径比越大,柱效越高。

色谱柱的柱效能是评价色谱性能的一项重要指标,混合物能否在色谱柱中得到分离,除取决于选择合适的固定相外,还与色谱操作条件及色谱柱的装填状况等因素有关。

不过在HPLC中,柱效一般出厂后就基本固答定,随着使用过程的损耗而柱效降低。人工填柱的色谱柱,因为每次装柱时所用的溶液、填料量都不尽相同,因此柱效也会有变化。测柱效主要是看柱是否具有良好的分离效果。

一、评价柱效

仪器:高效液相色谱仪(带自动进样器,或配置微量进样器)、分析天平。

试剂:苯、萘、联苯(均为分析纯)、甲醇(色谱纯)、纯净水。

色谱条件:色谱柱:C18,4.6×150mm,5μm;流动相:甲醇-水(80:20,v/v);

检测波长:254nm;流速:1mL·min-1;柱温:30℃;进样量:10μL。

 

操作步骤:

(1)分别精密配制含苯、萘、联苯浓度均为约1mg·mL-1的3份对照品溶液各10mL。

(2)分别精密吸取上述对照品溶液各2mL置于10mL容量瓶中,加流动相稀释,并定容至刻度,摇匀,得到含苯、萘、联苯的混合对照品溶液。

(3)按照上述色谱条件操作,进样,记录色谱图。

(4)计算各色谱峰的理论塔板数及各峰间分离度。

 

实验数据处理:

二、提高液相色谱柱效(HPLC)

1、提高液相色谱柱柱效的方法

要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手。

(1)降低移动相的流速,但会使分析时间延长。

(2)减少固定相的量,但色谱柱中样品的负载量也随之减小。

(3)减小固定相的颗粒度,但不能过分,过分后色谱柱的渗透率也会减小。

(4)选用低粘度的移动相,以利于快速传质,但却不利于多组份分析。

(5)适当提高柱温,可降低移动相的粘度,但柱效和分离度也随之降低。

(6)尽量减小停滞移动相的体积,但却加快了移动相的流速。

从以上介绍可看出,在色谱分析过程中,各种因素是互相联系和制约的。只有通过对柱效值的跟踪测算,对自己分析方法不断的研究和实践,才能找到最佳的工作条件。

2、对柱效值进行跟踪测算应注意的问题

我们也应记住柱效值并不足以预测在所有条件下的柱性能,对大多数色谱工作者来说,柱性能指的是色谱柱用于特定分离的能力,而仅仅有高柱效并不能保证这种分离能力。

不管用什么特定的测试方法,都会有几个参数影响柱效的测定。这些参数包括:洗脱液的成分和粘度及其线流速,测定塔板数所用的溶质,温度,柱长,填料装填方式,颗粒度,还有所选用的测量和计算方法。而测量和计算方法对柱效值的确定起着极大的作用。

 

三、提高气相色谱柱柱效(GC)

在实际工作中,我们通过对载气流速、进样技术、气化室温度、色谱柱、柱温、检测器温度这六个方面的选择,有效地提高了柱效率,使分析出的色谱峰峰形正常,无峰形扩张、拖尾、峰漏检等不良现象出现,分离度高,从而提高了分析结果的准确性。

所谓柱效就是在较短的时间内,用较短的柱子达到满意的分析结果。为了提高色谱柱的柱效率,减少色谱峰扩张、拖尾及峰漏检等现象.

1)载气流速的选择

气相色谱最常用的载气是:氢气、氮气、氩气、氦气。经过长时间的实验,发现对于一般色谱仪而言,载气流量为20-100ml/min

目前我们分析液化气用的是热导检测器,载气用的是氢气,其流量控制是30 ml/min。分析戊烷发泡剂用的是氢火焰离子化检测器,载气用的是氮气、燃烧气氢气和氧气,这三种气体的体积比是氮气:氢气:氧气为1:1:10,分析效果都是较好的。

(2)进样技术的选择

在气相色谱分析中,一般采用注射器或六通阀门进样。在考虑进样技术的时候,以注射器进样为主来研究。

进样量:进样量应控制在瞬间气化,达到规定分离要求和线性响应的允许范围内。填充柱冲洗法的瞬间进样量:液体样品或固体样品溶液一般为0.01~10μl,气体样品一般为0.11~10ml,在定量分析中,应注意进样量读数准确。

注射器里空气的排除:用微量注射器抽取液体样品,只要重复地把液体抽入注射器又迅速把其排回样品瓶,就可以将空气排除。或着用计划注射量的约2倍的样品置换注射器3~5次,每次取到样品后,垂直拿起注射器,针尖朝上,留在注射器里的空气都应当跑到针管顶部,推进注射器塞子,空气就会全部被排掉。

保证进样量的准确:用经置换过的注射器取约计划进样量2倍左右的样品,垂直拿起注射器,针尖朝上,让针穿过一层纱布,这样可用纱布吸收从针尖排出的液体。

进样手法:双手拿注射器。用一只手(通常是左手)扶针插入垫片,注射大体积样品(即气体样品)或柱前压力极高时,要防止从气相色谱仪注样器来的压力把注射器活塞弹出(即用右手的大拇指按压住活塞顶部)。让针尖穿过垫片尽可能深的进入进样口,压下注射器活塞停留1秒钟,然后尽可能快而稳地抽出针尖(抽出的同时继续压住注射器活塞)。

进样时间:进样时间长短对柱效率影响很大。若进样时间过长,遇使色谱区域加宽而降低柱效率。因此,对于冲洗法色谱而言,进样时间越短越好,一般必须小于1秒钟。

(3)气化室温度的选择

为选择合适的气化室温度,在多次的进样中我们发现,气化室温度比柱温高50-100℃或比样品组分中最高沸点高50-70℃较为合适。温度过高过低都会影响柱效。

  • 网友经验:提供柱效的有效途径

一般柱效不好,先排除其他问题,都没有问题的话就是柱子不行了。

如果柱子比较老,可以反过来小流速冲洗一下,我做过效果很好!(仅适用旧柱子啊,有点风险)。

把柱头变色的填料挖掉,用同类新的填料填充好,效果很好。

正向冲洗色谱柱、反向冲洗色谱柱、超声清洗色谱柱筛板、如果是柱内死体积增加则需更换新柱。

如果柱子真的很老旧了,就反相冲洗试试,可能还能用一段时间,但不会太久。在然后就只能换填料了,或换新的柱子。

我们前段时间也是柱效不好,其他都比较正常。后来把柱子重新活化了一下,柱效由原来的两千升到四千多了。不过维持了一个月又不行了。

提高色谱柱柱效,请记住一个口诀:

第一柱子温度能调高,第二可选柱子内径小。

第三柱外体积小更妙,第四使用超纯的硅胶。

第五氘灯要选能量高,第六采用中空透光灯。

第七改变有机相比率,第八流动相pH可鼓捣。

第九可把键合相选挑,第十改变有机添加剂。

十一改变流动相配比,十二缩短检测响应时间。

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