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HPLC常见的8个问题与实用对策

浏览次数:93 分类:产品资料库 分类:新闻中心 分类:杂质对照品

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。以制药领域为例:我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表:

鉴于HPLC在全行业运用越来越广泛,因此每一个实验室分析人员都应该熟练掌握并应用HPLC,对于一些常见的故障分析应该做到游刃有余,才能在运行故障的时候即使解决问题,提高工作效率。为此小编整理了常见HPLC故障及对策分析方案,不要错过哦。

1、保留时间发生漂移或快速变化原因?

关于漂移问题:

① 温度控制不好,解决方法是采用恒温装置, 保持柱温恒定;

② 流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 ;

③ 柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡。

 

关于快速变化问题

① 流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定;

② 泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出;

③ 流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。

 

2、出现拖尾或双峰的原因?

① 筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子;

② 存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子;改换流动相或更换选择性好的柱子 ;

③ 可能柱超载,减少进样量。

3、HPLC柱验收测试时柱压过高为什么?

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。

① 拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保 护柱的问题,若柱压仍高,再检查;

② 把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降, 否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查;

③ 将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动池)。这时,如果柱压仍不下 降,再检查;只用于使用过的柱子。

④ 更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高,请与厂商联系。一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题,SGE提供的Rheodyne 7315型,过滤器就是解决这一问题的最佳选择。

 

4、为何出现鬼峰?

①进样阀残余峰--每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗;

②样品中未知物--处理样品;

③柱未平衡--重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱);

④三氟乙酸(TFA)氧化--每天新配,用抗氧化剂 ;

⑤水污染(反相)--通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水 。

5、为何出现峰拖尾?

①柱超载——降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 ;

②峰干扰——清洁样品,调整流动相;

③硅羟基作用——加三乙胺,用碱致钝化柱,增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,纯化样品  ;

④柱内烧结不锈钢失效——更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 ;

⑤柱塌陷或形成短路通道——更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件;

⑥死体积或柱外体积过大——连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 ;

⑦柱效下降——用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱。

 

6、除了流速外,还有哪些因素能引起压力改变?

改变流动相组成和温度;改变柱长、柱内径和填料粒度;柱突然阻塞压力升高(正常情况下其它条件不变柱压都是逐渐升高的)。

7、怎样才会使峰位发生重排?

在分析多组分样品时,仅改变流动相的强度(组成百分比)而不改变其组成,一般仅仅改变所有组分的保留时间,不会发生峰位的重排。

下列条件改变可能发生峰位重排:流动相中换了强溶剂;PH值的改变;柱填料的改变;柱温的改变;流动相的组成改变(如加入离子对试剂三乙基胺等)。

8、 除了在线脱气,常用的实验室脱气方式还有哪些?

加热回流脱气,脱气效果最佳,但无法保持;氦脱气,此方法脱气效果佳,能除去百分之九十以上的空气,但氦气价格太贵,所以用的不多;真空脱气,效果仅次于氦脱气,但脱气过程中容易造成样品溶液挥发损失;超声脱气,只能脱去约百分之三十的空气,但在实验室中最常用。目前还是尽量争取用在线脱气,方便且效果好。

心邀生物依据ISO/IEC17025国际实验室通用准则建立了质量运营体系,并且CNAS资质认证,拥有上千平米的研发实验室、标准化检测实验室以及中试车间,拥有光谱、色谱、液相色谱质谱联用仪、电感耦合等大型精密技术设备,准确数据,报告齐全。

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